本次培训主要讲解了以下六个方面的内容:一、高效液相色谱法原理与方法发展二、高效液相色谱仪的原理、结构、使用和维护三、样品制备四、色谱柱的原理、选择及维护五、高效液相色谱数据处理及定性与定量分析六、高效液相色谱仪在各领域的应用由于高效液相色谱适于分析沸点高、相对分子量大，受热易分解的不稳定的有机化合物、生物活性物质以及多种天然产物，而这些化合物约占所有有机化合物的80%，因此，高效液相色谱仪具有广泛的使用范围，对于有机监测工作也就非常重要。而高效液相色谱仪的维护又决定了工作效率，因此为了能更好的更快速的完成监测工作，必须要懂得维护仪器，当然也必要的学习仪器的一些基本维修技术。对于经常遇到的堵塞问题是由于磷酸盐缓冲液在管路中沉积导致，解决办法就是每次做完实验先经纯水再经甲醇冲洗。色谱柱是高效液相色谱仪的核心部分，它的好坏直接影响到样品分离度的好坏，为了延长HPLC液相泵的使用寿命和维持其输液的稳定性，必须注意以下几方面的事项：1、防止任何固体微粒进入HPLC液相泵体，因为尘埃或其它任何杂质都会磨损HPLC液相柱塞、HPLC密封环、HPLC液相缸体和HPLC液相单向阀，因此应预先除去流动相中的任何固体微粒。流动相最好在玻璃容器内蒸馏，而常用的方法是过滤，可采用Millipore 滤膜（ 或 05um） 等滤器。2、流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲液的流动相不应保留在泵内，尤其是HPLC停泵过夜或更长时间的情况下。如果将含有缓冲液的流动相留在HPLC液相泵内，由于蒸发或泄漏，甚至只是由于溶液的静止，就可能析出盐的微小晶体，这些晶体将和上述固体微粒一样损坏HPLC密封环和HPLC柱塞等。因此，必须HPLC泵入纯水充分清洗后，再换成适合于HPLC色谱柱保存和有利于HPLC泵维护的溶剂（对于反相键合固定相，可以是甲醇或甲醇和水）。3、HPLC泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相用完，否则HPLC空泵运转也磨损HPLC柱塞、HPLC密封环或HPLC缸体最终产生漏液。4、HPLC输液泵的工作压力不要超过规定的最高压力，否则会使高压密封环变形，产生漏液。5、流动相应先脱气，以免在HPLC泵内产生气泡，影响流量的稳定性，如果有大量气泡HPLC泵就无法工作。而一些常见故障的原因和解决办法也是得掌握的：1、没有流动相流出，又无压力指示。原因可能是HPLC泵内有大量的气体，这时可打开泄压阀，使HPLC泵在较大的流量（5ml/min）下运转，将气泡排尽，也可用一个50ml的注射器在泵出口处帮助抽出气体。另一个原因可能是HPLC密封环磨损，需更换。2、HPLC压力的流量不稳。原因可能是气泡，需要排除，或者是单向阀内有异物，可以卸下HPLC单向阀，浸入丙酮内，进行超声清洗。有时有可能是砂滤棒内有气泡或被盐的微小晶体粒或滋生的微生物部分堵塞，这时卸下砂滤棒浸入流动相内，超声除气泡，或将砂滤棒（片）浸入稀酸（如4mol/L硝酸）内迅速除去微生物或将盐溶解，再立即清洗。3、HPLC压力过高的原因，是管路被堵塞，需要清除或清洗。压力降低的原因则可能是管路有泄漏。检查堵塞或泄漏时可逐段进行。在管路中存在气泡会造成色谱图上出现尖锐的噪声峰，严重时会造成分析灵敏度下降；气泡变大进入流路或色谱柱时会使流动相的流速变慢或不稳定，使基线起伏。因此流动相必须预先脱气，在注入样品前也应注意排出样品注射器中的空气。本次培训还指导了色谱柱的选择，只有选择合适的色谱柱才能取得很好的色谱峰，也就能很好的定性及定量分析。如果色谱柱经过一段时间的使用后有凹陷的情况，也可以自行填补，即打开柱头，以相同或者相似的填料将凹陷的部分填平。对严重污染的柱子可以掉头使用，但必须将连接检测器的一端断开，将污染物质冲走，若基线还是有杂峰，也可以进行挖补，往往可基本恢复。
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